50T 转基因品系玉米176 PCR试剂盒检测

​
服务流程：
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。

实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括定量和相对定量）和定性分析。主要服务：DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
检测方法包括以下步骤：
(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。
步骤(2)为：待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
储存条件：
14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
大量全血基因组DNA纯化　AURKA(Aurora kinase A) 　100 ul

粪便DNA分离　TNFSF9(Tumor necrosis factor ligand superfamily member 9) 　100 ul

粪便细胞DNA分离　MKRN3(makorin ring-finger protein 3) 　100 ul

粪便细菌DNA分离　OVA(Ovalbumin) 　100 ul

粪便DNA高质纯化　a1AGP(total alpha 1-acid glycoprotein) 　100 ul

粪便DNA分离＋高质纯化　CPB1(Carboxypeptidase B1) 　100 ul

石蜡切片DNA分离　NKp46/NCR1(Natural cytotoxicity triggering receptor 1) 　20 ul

石蜡切片DNA高质纯化　NKp44/NCR2(Natural cytotoxicity triggering receptor 2) 　100 ul

石蜡切片DNA分离＋高质纯化　NKp30/NCR3(Natural cytotoxicity triggering receptor 3) 　300 ul

石蜡切片组织线粒体DNA分离　Cavin 1(Polymerase I and transcript release factor) 　100 ul

口腔粘膜细胞基因组DNA纯化　INT6(IntegRator complex subunit 6) 　100 ul

植物基因组DNA纯化（低多糖/酚）　INT8(IntegRator complex subunit 8) 　20 ul

植物基因组DNA纯化（高多糖/酚）　D2HGDH(D2-HydroxyglutaRate Dehydrogenase) 　100 ul

土壤DNA分离　Total ER(Estrogen Receptor) 　100 ul

土壤DNA高质纯化　SAKL(Soluble alpha-Klotho) 　20 ul

土壤DNA分离+高质纯化　HIF3A(Hypoxia-inducible factor 3-alpha) 　100 ul
转基因品系玉米176 PCR试剂盒乳状原孢酵母种属: Sporopachydermia│lactativora分离基物: 加工玉米（maize-processing plant）提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: yes培养基: 0436生长条件: 25-28℃存储条件: 液氮超低温冻结法；真空冷冻干燥法；矿物油法

嗜冷芽孢八叠球菌种属: Sporosarcina│psychrophila提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: yes应用领域: 模式菌株培养基: 0221生长条件: 20℃存储条件: 液氮超低温冻结法;真空冷冻干燥法

Penicillium│funiculosum提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no培养基: 0015生长条件: 25-28℃存储条件: 液氮超低温冻结法;真空冷冻干燥法

Mycobacterium│tuberculosis提供形式: 冻干物安全等级: 3模式菌株: no应用领域: 研究生长条件: 37℃存储条件: 真空冷冻干燥法

Pestalotiopsis│paeoniae分离基物: 秋茄枝提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no应用领域: 内生菌培养基: 0014生长条件: 25-28℃存储条件: 液氮超低温冻结法;矿物油法

Bacillus│sp.分离基物: 污提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no培养基: 0002生长条件: 30℃存储条件: 液氮超低温冻结法;真空冷冻干燥法

Fusarium│sp.分离基物: 茎提供形式: 冻结物安全等级: 1模式菌株: no应用领域: 抗金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌培养基: CM0014生长条件: 25C存储条件: -80℃冰箱冻结；矿物油法

Laetiporus│sulphureus (Bull.) Murrill分离基物: 子实体提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no培养基: 14生长条件: 25存储条件: 定期移植法

Aestuariibacter│halophilus分离基物: 沉积物/深海沉积物提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no应用领域: 潜在的有机污染物降解菌/分离自石油富集菌群培养基: 821生长条件: 25℃存储条件: 液氮超低温冻结法；-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法