ISO 10993-23生物相容性刺激试验新方法—体外刺激试验

国际标准化组织于2021年1月颁布了刺激试验新标准ISO 10993-23，在ISO 10993-10的基础上丰富和优化了刺激试验体外替代方法的章节。刺激试验是医疗器械生物相容性测试的常规测试，医疗器械、医疗器械组件或生物材料的刺激试验可以使用器械、器械组件、生物材料本身或其浸提液进行，豚鼠、兔子都是典型的动物模型。一般通过皮内注射或者表面涂抹进行，动物的皮肤状况是试验的关键因素,只能使用皮肤健康无损伤的动物。推荐在自然光线或全光谱灯光下观察皮肤反应，依据皮肤的红斑、焦痂和水肿评分进行刺激性判定。任何已确定为皮肤、眼、黏膜组织刺激物的材料,或是pH≤2.0或≥11.5的材料,不应进行刺激试验。需要进一步的风险表征/评定的，例外情况下,即使已知被试材料是刺激物或材料的pH 在上述范围之外可能还是需要进行测试,这种情况应论证并形成文件。

随着全球对于动物福利的关注度越来越高，寻找验证新的体外测试途径格外重要。体外刺激试验符合3R原则 (Reduction,Replacement和Refinement)，可以大大缩短测试周期减少动物成本。SkinEthic™RHE 三维重建表皮模型由正常角质形成细胞在碳酸酯膜经过体外培养而成，含有正常的表皮角蛋白细胞,具有组织构造的基底、棘突及颗粒层以及与体内类似的多层角质层，结构和功能与人类的表皮非常接近。该型号均已通过ECVAM 验证可用于确定供试品的皮肤刺激性。

SkinEthic™RHE 三维重建表皮模型HE染色石蜡切片（细胞层数≥4）

方法

本试验中供试品分别在氯化钠溶液和精制芝麻油中于培养箱浸提。阴性/空白对照对照为同条件下处理的浸提介质，阳性对照为生理盐水溶解配制的1%（w/v）十二烷基硫酸钠(SDS/SLS)溶液。SkinEthic™RHE 三维重建表皮模型接收后转移至培养基中于二氧化碳培养箱培养过夜，次日取出模型给药，放回培养箱继续培养。约24小时后取出用不含 Ca2+ 和 Mg2+ 的PBS 彻底冲洗组织冲洗后转移至加有MTT的24孔板中，放回培养箱培养孵育，去除MTT溶液将SkinEthic™RHE 皮肤模型转移至加有异丙醇的震荡，混匀，酶标仪570nm波长测量吸光度。试验中阴性/介质对照应当大于0.7，阳性对照需引起显著的刺激性，所有活力数值标准差SD应当≤20%。

培养中的人工皮肤

培养中的人工皮肤

体外刺激试验显色后

体外皮肤刺激试验

体外刺激试验方法简便，可操作性强。HTW百检网医疗器械测试中心已完成对该方法的验证和培训工作。国际ISO 10993-23的颁布后，相信中国标准委员会已经开始筹划该标准转化工作。全球每年有大量的医疗器械需要评估刺激性需要进行大量动物试验，时间、成本、动物福利都是*为重要的考虑点。随着监管机构的逐步认可，该方法无疑会得到广泛的应用。

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