强致癌物——黄曲霉毒素应该如何检测？

黄曲霉毒素是由黄曲霉菌和寄生曲霉菌代谢产生的致癌、致畸、剧毒化合物，广泛分布于农作物的生长、收获、储运等各个阶段，是一类由黄曲霉菌和寄生曲霉菌产生的剧毒代谢产物，主要有黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2，以及另外两种代谢产物M1、M2。

黄曲霉毒素B1污染的食物主要是花生、玉米、稻谷、小麦、花生油等粮油食品，且以南方高温、高湿地区受污染*为严重。黄曲霉毒素耐热，280 ℃才可裂解，故一般烹调加工温度下难以破坏。因此，国际上的大多数国家均对食品中的黄曲霉毒素B1含量制定了限量标准。

在我国，国家质检总局规定黄曲霉毒素B1是大部分食品的必检项目之一。GB 2761-2005规定了玉米和花生及其制品、植物油、大米、其他粮食和婴幼儿配方食品中黄曲霉毒素B1的限量值分别为20、10、10、5、5 μg/kg。为满足不同的检测需求，国内外科学家不断的创新和改善黄曲霉毒素B1的检测方法。根据检测依据原理大致可分为质谱法和免疫学法。

高效液相色谱法(HPLC)

高效液相色谱法可以对黄曲霉毒素B1定量分析，其原理是：样品中黄曲霉毒素B1通过提取，净化等步骤进行富集，经过色谱柱分离后，通过测量色谱峰的面积进行定量。黄曲霉毒素免疫亲和柱HPLC法采用单克隆抗体免疫技术，可特异地将黄曲霉毒素与其他真菌素分离出来，分离效率和回收率高。此方法已得到广泛应用，并被美国官方分析化学家协会(AOAC)确认为官方检测方法。该方法的检测限可达0.02~5 ppb。

GB/T 18979-2003规定了免疫亲和层析净化高效液相色谱检测食品中黄曲霉毒素B1的方法。样品经过甲醇水混合溶液的提取，定量滤纸和玻璃纤维滤纸的过滤，通过免疫亲和柱。免疫亲和柱(IAC)是根据单克隆抗体与载体蛋白偶联后将其填柱形成IAC，并与黄曲霉毒素抗原产生一一对应的特异性吸附关系制作成。试样滤液通过免疫亲和柱，滤液中的黄曲霉毒素与免疫亲和柱产生特异吸附，用蒸馏水充分洗涤免疫亲和柱将其他杂质等成分从柱中洗脱，再用甲醇将黄曲霉毒素洗脱下来。通过碘法柱后衍生增强测定时黄曲霉毒素的荧光强度。通过控制流动相的比例、流速、柱温，将黄曲霉毒素的色谱峰与干扰峰分离，利用色谱峰面积进行定量测定。在一般实验中，也有用三氟乙酸进行柱前衍生。

高效液相色谱法是实验室常用检测黄曲霉毒素B1的方法，具有可靠性强，灵敏度高，定量分析准确的优势;但同时因为其所用检测仪器设备昂贵，操作专业性强，因此推广性不强，不适合进行快速检测。

酶联免疫法(ELISA)

酶联免疫法检测黄曲霉毒素B1的理论基础是抗原抗体反应和酶与底物显色反应，采用单克隆或多克隆抗体技术，具有特异性强、分析时间短、灵敏度高的特点。计融 等在生产抗总黄曲霉毒素单克隆抗体基础上，利用间接竞争酶联免疫法研制出具有中国自主知识产权的总黄曲霉毒素酶联免疫检测试剂盒，其*低检出浓度为0.26 μg/kg，对样品的*低检出量为1.5 μg/kg，*低检出限为0.02 μg/kg。但测试稳定性较差，由于酶的不稳定性，使得在实际检测中易出现假阳性或假阴性的结果。

液相色谱串联质谱法

一般来说，组织中黄曲霉毒素含量很低，而液相色谱串联质谱法具有比高效色谱法更高的灵敏度和准确性，如今这种方法还很少使用在测定组织霉菌毒素含量中。该方法检测限可达0.02～0.025 ppb。康绍英 等人将高效液相色谱与三重四级杆质谱串联，建立4种黄曲霉毒素的定性定量分析方法。黄曲霉毒素在所测试浓度范围内与峰面积呈线性关系，r>0.998，平均加标回收率在80.6%~100.6%，黄曲霉毒素B1*低检出限为0.2 μg/kg。

金标免疫层析法

金标免疫层析法是利用纳米金作为标记物的快速免疫诊断技术。该方法避免了复杂的前处理过程，检测过程中无需进行试剂处理，适用于快速的现场检测。研究结果表明采用该方法的*低检出限可达2.5 ng/mL。

时间分辨免疫荧光分析法

时间分辨免疫荧光分析是近来发展起来的新型分析技术。该方法利用三价稀土离子与螯合剂及抗原形成螯合物作为标记物，利用时间分辨荧光光谱仪测试稀土离子的发光强度来检测抗原量。黄飚等采用该技术建立了高灵敏的黄曲霉毒素B1间接竞争免疫分析法，检出限为0.01 μg/L,平均回收率可达88%。

随着生物化学、分子生物学、免疫学等学科的发展，科学家不断探索更快捷，准确，灵敏度高的检测方法，以满足不同的检测需求。以金标法为代表的方法已被广泛的应用。目前，黄曲霉毒素的检测方法将继续改进以获得更高灵敏度，满足快速检测及同时检测多种毒素的需求。