食品添加剂 二十二碳六烯酸油脂检测

本检验方法中使用的部分试剂具有毒性和腐蚀性，操作时须小心谨慎。如溅到皮肤上应立即用水冲洗，严重者应立即治疗。使用易燃品时，严禁使用明火加热。

A.2 一般规定

除另有说明外，所用试剂均为分析纯，检验用水符合GB/T6682—2008中规定的三级水。检验中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T601、GB/T602和GB/T603的规定制备。

A.3 二十二碳六烯酸(DHA)甘油三酯的测定

A.3.1 试剂和材料

A.3.1.1 二十二碳六烯酸(DHA)甘油三酯标准品：纯度≥99%。

A.3.1.2 十三碳烷酸甘油三酯标准品：纯度≥99%。

A.3.1.3 氢氧化钾。

A.3.1.4 无水甲醇。

A.3.1.5 正庚烷，色谱纯。

A.3.1.6 石油醚，沸程，30℃～60℃。

A.3.1.7 氢氧化钾甲醇溶液(4mol/L):称取22.4g氢氧化钾(A.3.1.3)于烧杯中，加入适量无水甲醇(A.3.1.4)使溶解，并转移至100mL的容量瓶中，当氢氧化钾甲醇溶液冷却至室温后，用无水甲醇稀释至刻度，摇匀。

A.3.1.8 二十二碳六烯酸(DHA)甘油三酯储备液(10mg/mL)：称取250mg(精确至0.0001g)二十二碳六烯酸(DHA)甘油三酯(A.3.1.1)于25mL容量瓶中，加入适量正庚烷(A.3.1.5)使溶解，并稀释至刻度，摇匀。

A.3.1.9 十三碳烷酸甘油三酯内标储备液(10mg/mL)：称取0.25g(精确至0.0001g)十三碳烷酸甘油三酯(A.3.1.2)于25mL容量瓶中”加入适量正庚烷(A.3.1.5)使溶解，并稀释至刻度，摇匀。

A.3.1.10 标准工作溶液的配制

按表A.1分别移取适量二十二碳六烯酸(DHA)甘油三酯储备液(A.3.1.8)于6个10mL容量瓶中，分别移入2.0mL十三碳烷酸甘油三酯内标储备液(A3.1.9),加入正庚烷(A.3.1.5)稀释至刻度，摇匀。

表A.1 标准工作溶液中二十二碳六烯酸(DHA)甘油三酯含量

A.3.1.11 氮气，纯度≥99.999%。

A.3.1.12 氦气，纯度≥99.9999%。

A.3.2 仪器和设备

A.3.2.1 气相色谱-质谱仪。

A.3.2.2 气相色谱仪，配氢火焰离子化检测器。

A.3.2.3 分析天平：感量为0.01g、0.1mg。

A.3.2.4 离心机。

A.3.2.5 振摇器。

A.3.3 定性分析

A.3.3.1 二十二碳六烯酸(DHA)油脂

称取0.25g(精确至0.01g)试样于50mL容量瓶中，加入适量正庚烷(A.3.1.5)使溶解，并稀释至刻度，摇匀。准确吸取2mL正庚烷溶解液于10mL带盖离心管中，加入0.2mL氢氧化钾甲醇溶液(A.3.1.7),剧烈振荡1min以上，放置10min(甲基化反应)。如有机层浑浊，可离心使之澄清。取上层有机相溶液备用。

A.3.3.2 测定

A.3.3.2.1 气相色谱条件

a)色谱柱：DB-5ms(30.0m×0.25mm×0.25μm)石英毛细管柱，或相当者；

b)柱温程序：100℃保持3min,以10℃/min升至260℃,保持8min；

c)载气：氦气(A.3.1.12):

d)流速：1.0mL/min;

e)进样口温度：250℃。

f)进样模式：分流进样(分流比为1:10)；

g)进样模式：1uL。

A.3.3.2.2 质谱条件

a)离子源：EI源，70eV；

b)接口温度：280℃；

c)离子源温度：230℃；

d)四*杆温度：150℃；

e)数据采集模式：全扫描；

f)质量扫描范围：20m/z～330m/z；

g)溶剂延迟3.5min。

A.3.3.3 结果判定

试样的质谱图应与二十二碳六烯酸(DHA)甲酯标准品的质谱图(附录B中图B.1)—致。

相关链接：食品添加剂二十二碳六烯酸油脂(发酵法)