食品添加剂咖啡因检测

A.6 灼烧残渣的测定

A.6.1 试剂和材料

硫酸。

A.6.2 分析步骤

取1.0g实验室样品，精确至0.001g,置于已在(750±50)℃烧至恒重的瓷坩埚中，用小火缓慢加热至完全炭化。冷却至室温后，加硫酸0.5mL～1mL使湿润，低温加热至硫酸蒸气除尽后，移入高温炉中，在(750±50)℃高温炉中灼烧至恒重。

A.6.3结果计算

灼烧残渣的质量分数以w3计，数值以％表示，按公式(A.3)计算：

式中：

m4—坩埚和残渣总质量的数值，单位为克(g)；

m5—坩埚质量的数值，单位为克(g);

m—样品质量的数值，单位为克(g)。

取平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行测定结果的**差值不大于0.02%。

A.7 其他生物碱的测定

A.7.1 试剂和材料

碘化汞钾试液：取1.36g二氯化汞，加60mL水使溶解，另取5g碘化钾,加10mL水使溶解，将两液混合，混合后加水稀释至100mL。

A.7.2 分析步骤

称取1g实验室样品，加50mL水，取10mL该溶液加3滴碘化汞钾试液，不得产生沉淀。

A.8 色谱纯度的测定

A.8.1 试剂和材料

A.8.1.1 无水乙酸钠。

A.8.1.2 乙腈：色谱纯。

A.8.1.3 四氢呋喃：色谱纯。

A.8.1.4 冰乙酸。

A.8.1.5 茶碱对照品。

A.8.1.6 咖啡因对照品。

A.8.2 仪器和设备

高效液相色谱仪。

A.8.3 色谱分析条件

推荐的色谱柱及典型色谱操作条件见表A.1,咖啡因系统适用性试验高效液相色谱图参见图C.1,各组分的相对保留时间参见表C.1。其他能达到同等分离程度的色谱柱和色谱条件均可使用。

表A.1 色谱柱和典型色谱操作条件

A.8.4 分析步骤

A.8.4.1 对照品溶液：称取约2mg茶碱对照品，精确至0.0001g,置100mL容量瓶中，加约50mL流动相振摇，并用超声波溶解，用流动相稀释到刻度，混匀。

A.8.4.2 系统适用性试液的制备：称取约5.0mg咖啡因对照品，精确至0.0001g,置25mL容量瓶中，加5.0mL对照品溶液和10mL流动相，振摇，超声溶解，再用流动相稀释到刻度，混匀。

A.8.4.3 实验室样品液的制备：称取约Iomg咖啡因实验室样品，精确至0.0001g,置50mL容量瓶中,加10mL流动相，振摇，超声溶解，再用流动相稀释到刻度，混匀。

A.8.4.4 仪器准备:按照高效液相色谱仪操作规程准备仪器,设定流速为1mL/min,检测波长为275nm,用流动相平衡仪器后，开始进样操作。

A.8.4.5 系统适应性试验：取10uL系统适用性试液进样，记录色谱图，茶碱和咖啡因的相对保留时间依次约为0.69，1.0；两峰间的分离度不得小于6.0；每个峰的拖尾因子T≤2.0。

A.8.4.6 测定：取流动相和样品溶液各10uL进样，记录色谱图至咖啡因主峰保留时间的两倍。按面积归一化法计算各杂质含量。

A.8.5 结果计算(面积归一化法)

杂质含量的质量分数以w4计，数值以％表示，按公式(A∙4)计算：

式中：

A_杂—杂质峰的峰面积(除溶剂峰及主峰外)；

∑A—所有峰的面积之和(溶剂峰除外)。

A.9 砷的测定

取(1.0±0.01)g实验室样品，加20mL水，加热溶解，冷却至室温后转移至100mL锥形瓶中，加5mL盐酸、5mL碘化钾试液，5滴酸性氯化亚锡溶液，按照GB/T5009.76—2003砷斑法的规定进行。