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高效液相色谱仪故障排除及检定技巧

作者:宋检 时间:2022-11-08 来源:互联网

高效液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来,一些问题可通过改变设备参数解决,一些问题必须通过修改操作程序解决,而正确选择色谱柱和流动相是得到好的色谱图的关键。

一、常见故障及排除

1.基线漂移偏大

(1)柱温波动:控制好柱子和流动相的温度。

(2)流通池被污染或有气泡:用甲醇或其他强*性溶剂冲洗流通池。

(3)检测器出现阻塞,高压造成流通池窗口破裂,产生噪音基线:取出阻塞物或更换管子,更换流通池窗需参考检测器手册。

(4)柱平衡慢:特别是流动相发生变化时,用中等强度的溶剂冲洗,提前预约客户,在分析前用10~20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。

(5)流动相污染、变质或由低纯度溶液配成:使用高品质的化学试剂及高效液相色谱(HPLC)级的溶剂。

(6)样品中有强保留的物质(高K′值)以馒头峰样被洗脱出,从而表现出一个逐步升高的基线:使用保护柱,如有必要,在进样之间或在分析过程中,用强溶剂冲洗柱子。

(7)流动相不均匀、配比不当或流速有变化:在配制流动相时应充分摇匀,同时要根据目标分离物和流动相的*性合理配比,并保持流速恒定。

(8)柱子平衡时间短:HPLC色谱柱根据使用环境不同,平衡时间通常要控制在(30~60)min。

(9)检测器没有设定在*大吸收波长处:检测器没有设定在*大吸收波长处不仅影响检测器的灵敏度和结果的准确度,还会使基线漂移加大,应该将检测器设定在*大吸收波长处。

2.噪声偏大

(1)在流动相、检测器或泵中有空气:流动相脱气,并冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。

(2)管路漏液:检查管路接头是否松动,泵是否漏液,是否有盐析出和不正常的噪音。

(3)流动相污染、变质或有低纯度溶液配制:使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂。

(4)温度差异影响(柱温过高,检测器未加热):减少差异或加上热交换器。

(5)在同一条线上有其他电子设备:断开LC、检测器和记录仪,检查干扰是否来自于外部,加以更正。

(6)检测器/ 记录仪电子元件的问题:断开检测器和记录仪的电源,检查并更正。

(7)泵震动:在系统中加入脉冲阻尼器。

(8)检测器灯能量不足:更换灯。

(9)色谱柱填料流失或阻塞:更换色谱柱。

3.重复性偏大

(1)峰型不佳(如峰拖尾、峰宽较大、分裂峰等都不利于峰面积的计算,造成重复性偏大):可以改变色谱柱条件,改变温度、流速等参数,以获得较尖锐的峰型,利于保证积分的准确性。

(2)泵流速不稳:可以根据泵流速检定情况作出判断,泵流速的稳定性对峰面积的重复性影响非常大。例如:在其他条件不变的情况下,将流速由1.0mL/min改为0.5mL/min,结果保留时间加倍,峰面积也加倍,也可以看出峰面积在一定条件下基本与流速成反比。

(3)色谱柱影响:色谱柱固定相的流失,以及色谱柱对标样的吸收等都会影响检测结果;特殊情况下还会发生柱子对样品的不可逆吸收,建议使用替代柱。

(4)柱温有变化:柱温对保留时间有显著影响,保留时间的变化直接影响积分面积的大小。因此应保持柱温恒定。

(5)进样器漏液:进样器漏液导致进入色谱柱的样品量发生变化,进而导致峰面积发生变化,应检查进样垫等易损部件以排除漏液。

(6)样品本身的影响:样品降解或溶剂挥发都会导致重复性偏大,应确定方法的准确性和采取措施控制挥发。

二、液相色谱仪的检定技巧

在检定中,有可能工作量比较大,时间比较长。如进一次样,等待样品出峰可能需要10min以上,而按照检定规程要求,至少要进6次样,如此一项做下来,可能就需要一两个小时。这就要求检定人员必须提高工作效率,合理安排工作时间。如在检定员下厂前*好预约客户,通知其预热仪器,有的还需要预先冲洗色谱柱,因为根据企业检测样品不同,仪器色谱柱内往往残留各种杂质,给检定带来不确定因素。如果到了现场再冲洗,更换流动相,等仪器稳定下来,有可能要半天的时间。这里提供两个检定技巧供参考。

一是自备替代柱(*好选用符合规程、对标物保留时间较短的色谱柱)。

二是连续进样。对于连续进样,出于定性分析的要求,还应当配备一个秒表,记录并计算各次进样的保留时间(操作方法:**要选用可以连续记录6次以上的秒表,在**次进样时,便用秒表与工作站同步计时,然后记录各个后续进样的时间,再与工作站出峰时间依次对应,计算保留时间)。但是,一定要保证计时准确,否则会影响定性重复性指标的判断。

作者:魏惠萍

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