1 范围
本标准规定了测定人参中9种人参皂苷的高效液相色谱方法。
本标准适用于人参中人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rg1、Rg2和Rf的测定。
2 规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的*新版本。凡是不注日期的引用文件，其*新版本适用于本标准。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 15517.1 模压红参分等质量标准
3 原理
试样经乙醚脱脂后，用甲醇索氏提取提取后的样液用SPEC8柱净化，利用高效液相色谱仪(紫外检测器)对试样中的9种人参皂苷进行分离和测定，外标法定量。
4 试剂和材料
除非有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682 中规定的一级水。
4.1 70%乙醇溶液：取700mL无水乙醇，用去离子水稀释至1000mL。
4.2 甲醇：色谱纯。
4.3 乙醚。
4.4 人参皂苷标准品：Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rg1、Rg2、R(含量98%)。
4.5 标准混合溶液：逐一准确称取0.183gRe、O.163gRg1、0.102gRf、O.102gRg2、0.255gRbl、0.306gRc、0.367gRb2、0.408gRb3、0.214gRd(精确至0.0001g)人参皂苷标准品，置于100mL容量瓶中，用甲醇定容，配制成质量浓度为1.8g/L、1.6g/L、1.0g/L、1.0g/L、2.5g/L、3.0g/L、3.6g/L、4.0g/L和2.1g/L的混合标准溶液，贮存在-18℃以下冰箱中，有效期6个月。
5 仪器
5.1 高效液相色谱仪：配有紫外检测器
5.2 电子天平：感量为0.001g。
5.3 电子天平：感量为0.0001g。
5.4 旋转蒸发仪。
5.5 索氏提取器。
5.6 控温水浴。
5.7 循环水多用真空泵。
5.8 粉碎机。
5.9 样品筛：孔径0.25mm。
5.10 SPE C18小柱：1000mg填料，6mL。
5.11 微量进样器：5HL~50μL。
6 试样制备
按GB/T 15517.1-1995 中6.3的规定执行。
7 分析步骤
7.1 样品提取
准确称取人参干样2g(精确至0.01g)，加入100mL乙醚于索氏提取器中，提取1h，弃去乙醚，待残渣中乙醚挥干后，再加入甲醇回馏8h。
7.2 样品净化
7.2.1 SPE C18 柱的预处理
先用20mL去离子水淋洗 SPE C18柱，然后用20mL的甲醇进行活化，再用20mL去离子水平衡。待水与柱筛板近平时上样。
7.2.2 提取液的处理
提取液在60℃水浴条件下，经旋转蒸发仪减压浓缩至近干，氮气吹干，加入4mL去离子水充分摇匀。取2mL注入预先活化好的SPE C18柱中，待液面与柱筛板近平时，倒入10mL去离子水淋洗SPE C18柱，弃去流岀液待淋洗液液面与柱筛板近平时，加亼25mL乙醇溶液(4.1)洗脱 SPE C18柱，收集洗脱液于50mL刻度试管中，氮气吹至25mL以下，用甲醇定容至25mL，混匀后，用0.2μm滤膜过滤，待测。
7.3 测定
7.3.1 仪器参考条件
7.3.1.1 色谱柱：C18(4.6mm×300mm×0.5μm)或相当者。
7.3.1.2 流动相：甲醇十水。
7.3.1.3 柱温：47℃。
7.3.1.4 流速：0.5mL/min~0.8mL/min。
7.3.1.5 检测波长：202nm。
7.3.1.6 进样量：10μL。
7.3.1.7 梯度洗脱程序见表1。
7.3.2 标准曲线的绘制
用混合皂苷标准工作液(4.5)按着梯度洗脱程序进行分析。准确吸取0mL、2mL、4nL、6mL、8mL、10mL混合皂苷标准溶液(4.5)，分别置于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，准确吸取10μL各容量瓶中的标准溶液，分别注入液相色谱仪，记录峰面积。以各皂苷进样的质量浓度对其峰面积绘制标准曲线。
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