作者:banjian77 时间:2022-10-19 来源:互联网
植物遗传转化是将重组质粒导入受体基因组的过程,通常使用的策略包括农杆菌介导法、基因枪法、聚乙二醇(PEG)法和花粉管通道法等。
农杆菌介导法:世界上**例转基因植物采取的就是此方法。根癌农杆菌和发根农杆菌属于革兰氏阴性菌,可广泛侵染双子叶植物,在一定条件下还能侵染单子叶植物。根癌农杆菌含有Ti质粒,该质粒上的T-DNA可插入到植物基因组中,诱导瘤状物的形成。因此,将目标序列插入到T-DNA中,可通过Ti质粒的载体作用,使目标序列整合到受体基因组中并表达。具体地,农杆菌介导法又可细分为原生质体共培养法、叶盘法、创伤植物感染法等,可根据受体材料类型选择合适的农杆菌介导法。
基因枪法:基因枪法又被称为微弹轰击法,其原理是将携带外源DNA的金属粒子打入植物细胞或组织中,实现基因转移。基因枪法的优点包括:无宿主限制,靶受体类型广泛(具有潜在分生能力的细胞或组织都可),步骤简单易操作,不需制作原生质体等。基因枪法的缺点是整合位点具有随机性,拷贝数往往较多,基因不容易稳定表达(后代容易出现突变、外源基因丢失)等,且基因枪法较为昂贵。
PEG法:PEG法的原理是通过聚乙二醇改变受体细胞的细胞膜通透性,从而使外源DNA更容易进入原生质体。该方法不需要昂贵、特殊的设备,实验结果比较稳定。原生质体是除去细胞壁的不完整细胞,是遗传操作的好材料。PEG法可瞬间表达外源基因,也可获得稳定表达的转基因细胞系或者转基因植株。
花粉管通道法:花粉管通道法的原理是利用植物受粉后,雌蕊柱头上萌发形成花粉管通道,外源DNA液通过微量注射器进入花中。观察后代的变异,筛选转基因植物。该方法的特点是不需要经过组织再生,省去人工组培过程,并且,后代植株中无镶嵌体的存在,但是转化率低、重复性不高。
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