毛细管柱气相色谱法测定白酒中的甜蜜素

　　甜蜜素(环己基氨基磺酸钠)是一种人工合成的非营养型水溶性、高甜度且价格低廉的甜味剂，已广泛应用于食品加工业，但其超量、超范围添加现象严重。目前，由于甜蜜素的安全性尚存争议，因此甜蜜素项目一直是质监部门实施食品质量安全风险监测的重点之一[1]。按照GB2760–2011的规定，甜蜜素在加工食品中的允许使用范围不包括白酒，但有些企业为调节口感而违规添加甜蜜素或添加含有甜蜜素的复合调酒剂。目前测定甜蜜素的国家标准GB/T5009.97–2003是针对食品中甜蜜素的通用检测方法[2]。采用该方法检测白酒时，由于白酒中环己醇及环己基的类似物质可能与亚硝酸钠反应，生成环己醇亚硝

　　酸酯，而被误认为是环己基氨基磺酸钠与亚硝酸钠的反应，造成含有甜蜜素的假象，因此国家卫生部已停止将该方法用于对白酒的测定。陈玉波等[3]报道了气相色谱毛细管柱内标法测定白酒中甜蜜素含量，证明了方法的可行性，但未对方法的检出限进行详细说明。SN/T1948–2007是目前白酒中甜蜜素的检测方法之一[4]，但因液相色谱–质谱联用设备运行成本高而难以普及，导致部分检测部门没有能力承担白酒中甜蜜素的检测任务，降低了对白酒中甜蜜素的控制力度，致使一些含有甜蜜素的白酒充斥消费市场。因此亟待建立一种简便，易于推广的检测方法。

　　笔者针对国标方法可能会造成假阳性的特点，对样品前处理方法进行改进，以消除相应的影响因素并对仪器条件进行优化，降低方法的检出限。与液相色谱–质谱联用法进行了比对试验，证明该方法测定结果可靠，操作简便，易于推广。1实验部分

　　1.1主要仪器与试剂

　　气相色谱仪：AgilentGC7890A型，配有FID检测器，自动进样器，10μL微量进样器，美国安捷伦公司;电子分析天平：AL204型，梅特勒–托利多仪器(上海)有限公司;白酒样品：实验室抽检样品;甜蜜素(环己基氨基磺酸钠)标准品：纯度不低于98%，美国Supelco公司;环己基氨基磺酸钠标准溶液：1mg/mL，精确称取0.1000g环己基氨基磺酸钠标准品，加入水溶解并定容至100mL，摇匀;正己烷、氯化钠：分析纯;硫酸溶液：100g/L，分析纯;亚硝酸钠溶液：50g/L，分析纯;所用试剂除特殊说明外均为分析纯;实验用水为去离子水。

　　1.2仪器工作条件

　　毛细管色谱柱：HP–INNOWAX柱(30m×0.32mm，0.25μm，美国安捷伦公司);进样口温度：180℃;检测器温度：220℃;程序升温：初始温度50℃，保持7min，以50℃/min升至200℃，保持1min;载气：氮气;流速：2.0mL/min;氢气流量：mL/min;空气流量：300mL/min;尾吹气流量：25mL/min;进样量：1μL;分流比：5∶1;保留时间定性，峰面积定量。

　　1.3实验方法

　　1.3.1标准溶液处理和测定

　　分别准确吸取0.00，0.10，0.20，0.40，0.80，1.00，2.00mL环己基氨基磺酸钠标准溶液于7个25mL具塞比色管中，加水至10mL置冰浴中，加入2.5mL50g/L亚硝酸钠及2.5mL100g/L硫酸溶液，摇匀，在冰浴中放置30min，并经常摇动，然后准确加入5mL正己烷、2.5g氯化钠，振摇100次，分层后取正己烷层进样1μL进行色谱分析。对应各点的浓度分别为0.00，0.02，0.04，0.08，0.16，0.20，0.40g/L,根据分析结果绘制标准曲线。

　　1.3.2样品处理和测定

　　称取100.0g白酒试样于250mL烧杯中，用40g/L氢氧化钠溶液调至碱性，置于水浴锅上，将白酒样品挥发至干，用10mL蒸馏水分3次将残留物转移至25mL带塞比色管中，摇匀，置于冰浴中[5]。其余过程同标准溶液处理方法。

　　1.4色谱图

　　在选定的色谱条件下环己基氨基磺酸钠标准液的色谱图见图1。

　　2结果与讨论

　　2.1样品处理可行性分析

　　甜蜜素(环己基氨基磺酸钠)对光、热稳定，因此水浴加热不会对其造成影响。白酒中可能存在对甜蜜素测定造成影响的醇酯类物质如环己醇等，在蒸干过程中将挥发掉，不会对测定结果造成影响。

　　2.2色谱峰校准方法

　　衍生处理后在毛细管柱上会出现两个峰，前面的峰较大是环己醇亚硝酸酯峰，后面的峰较小，是环己醇峰[6]，但随着时间推移，前面的峰逐渐变小，后面的峰逐渐变大，若用一个峰校准则结果误差较大。通过对两个峰面积的变化趋势进行分析发现，单个峰的面积是不断变化的，而两个峰面积之和基本处于平衡，因此选择两个峰面积之和进行定量，结果更

　　加准确可靠。仪器工作站中有峰面积加和定量的功能，计算方便快捷。

　　2.3工作曲线

　　对1.3.1中的系列环己基氨基磺酸钠标准溶液进行测定，以环己基氨基磺酸钠浓度X(g/L)为横坐标，以色谱峰面积Y为纵坐标进行线性回归。结果显示，在0.02～0.40g/L浓度范围内有良好的线性关系，线性方程为Y=1565.32X–2.27，线性相关系数r=0.9998。

　　2.4方法检出限

　　在国标方法的基础上，通过以下措施降低方法的检出限：(1)用毛细管色谱柱代替填充柱，稳定性和灵敏度都明显提高;(2)在样品处理过程中，采用增大样品量进行蒸干浓缩的方式;(3)在衍生过程中减少加水量及衍生试剂的加入量;(4)将萃取过程正己烷的加入量减半，相当于增大浓缩倍数，经回收试验验证符合要求。以3倍信噪比计算仪器的检出限为2mg/L，经换算，方法的检出限为0.1mg/kg，与SN/T1948–2007液质方法检出限(0.10mg/kg)相吻合，证明该方法可以用于白酒中甜蜜素的检测。

　　2.5精密度试验

　　对同一个加标样品进行6次平行测定，峰面积测定结果见表1，由表1可知测定结果的相对标准偏差为4.06%。

　　2.6回收试验

　　分别选取3种不同香型阴性白酒样品，进行加标回收试验，测定结果及回收率计算结果见表2。由表2可知，不同香型白酒中甜蜜素回收率没有明显差别，在88%~96%之间。

　　2.7比对试验

　　为验证该方法测定白酒中甜蜜素含量的准确性，选取6个阳性白酒样品，分别用气相色谱法与液相色谱–质谱法进行比对试验，结果见表3。由于液相色谱–质谱法测定白酒中的甜蜜素是通过基质匹配绘制标准曲线，排除了白酒基质的干

　　扰，滤膜过滤之后进行测定，不存在较大的损失，测定结果准确度高;气相色谱法测定的结果相对于液质法略低，原因是由于气相色谱法样品前处理中衍生过程和萃取过程都比较复杂，会对测定结果造成一定的影响，但两种方法测定结果的相对偏差为3.3%~8.3%，在误差允许范围之内。