食品添加剂 聚葡萄糖检测

A.1 一般规定

除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T6682-2008中规定的水。分析中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T601、GB/T602、GB/T603的规定制备。本试验所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。

A.2 鉴别试验

A.2.1 试剂和材料

a)硫酸。

b)丙酮。

c)苯酚溶液：50g/L。

d)柠檬酸铜碱性试液：称取173g柠檬酸钠(C₆H₅Na₃O₇·2H₂O)和117g碳酸钠(Na₂CO₃·H₂O)，在加热下溶于约700mL水中，必要时用滤纸过滤。在另一容器中，称取17.3g硫酸铜(CuSO₄·5H₂O),溶于约100mL水中，然后将此溶液在稳定搅拌下缓慢地加入上述溶液。

冷却后，用水稀释至1000mL,混匀。

A.2.2 分析步骤

A.2.2.1 取1滴100g/L试样液，加入4滴苯酚溶液，然后迅速加入15滴硫酸，应产生深黄至橘黄颜色。

A.2.2.2 取1mL 100g/L试样液，在强烈搅拌下加入1mL丙酮，溶液应透明。在该透明溶液中，加入2mL丙酮，强烈搅拌，溶液立即呈乳白色混浊。

A.2.2.3 取1mL 20g/L试样液，加入4mL柠檬酸铜碱性试液，加热至剧烈沸腾2min～4min，移去热源，让其沉淀、澄清，其上层清液应呈蓝色或蓝绿色。

A.3 聚葡萄糖的测定

A.3.1 试剂和材料

a)a-D-葡萄糖标准品：质量分数≥98.0%。

b)苯酚。

c)硫酸。

d)苯酚溶液：4g/mL；准确称取80g苯酚，加入20mL水溶解，混匀。

A.3.2 仪器和设备

分光光度计。

A.3.3 分析步骤

A.3.3.1 葡萄糖标准溶液的制备

称取适量的a-D-葡萄糖标准品，用水溶解后配制成0.2mg/mL的标准原液。用标准原液配制成系列浓度的标准溶液：5ug/mL。10ug/mL、20ug/mL、30ug/mL、40ug/mL和50ug/mL。

A.3.3.2 试样液的制备

称取约0.25g试样(精确至0.0001g)，用水溶解并定容至250mL,混匀后，用移液管吸取10.0mL,加水稀释并定容至250mL，此为试样液。

A.3.3.3 葡萄糖标准曲线的绘制及试样液的测定

用移液管吸取2.0mL系列浓度的标准溶液、试样液和蒸馏水(作为空白)，分别置于不含丙酮的15mL螺口小瓶中，分别加入0.12mL苯酚溶液，盖上瓶塞并轻轻混匀。打开瓶塞，迅速加入5.0mL硫酸。盖紧小瓶，剧烈摇匀。注意添加硫酸时需带橡胶手套及其他安全护具。

小瓶在室温下保持45min，然后选择合适的分光光度计测定每一小瓶中溶液在490nm处的吸光值，测定时用加有蒸馏水的苯酚-硫酸混合液做空白参比。重复实验三次，得到系列浓度的标准溶液的平均吸光值和试样液的平均吸光值。以系列浓度的标准溶液的平均吸光值为纵坐标，标准溶液浓度(ug/mL)为横坐标，绘制标准曲线。

A.3.4 结果计算

聚葡萄糖的含量X1按式(A.1)计算：

式中：

X1—试样中聚葡萄糖的含量(以干基、无灰分品计)，％；

1.05—推导校正因子；

A—试样液的吸光值；

Y—标准曲线的y轴截距；

S—吸光值对葡萄糖浓度(ug/mL)标准曲线的斜率，大约是0.02;

c—试样液的浓度(根据试样的干燥失重和灰分含量，换算成以干基、无灰分品计的浓度)，单位为微克每毫升(ug/mL);

PG,PL—单体试验中分别测得的葡萄糖和1,6-脱水-D-葡萄糖的含量，％；

1.11—1,6-脱水-D-葡萄糖的转换系数。

A.4 pH的测定

称取约10g试样(精确至0.001g)，用水溶解并定容至100mL，摇匀，用pH计进行测定。

A.5 1,6-脱水-D-葡萄糖、葡萄糖和山梨糖醇的测定

A.5.1 试剂和材料

a)1,6-脱水-D-葡萄糖标准品：质量分数≥98.0%。

b)葡萄糖(a-D-葡萄糖)标准品：质量分数≥98.0%。

c)山梨糖醇标准品：质量分数≥98.0%。

d)硫酸。

A.5.2 仪器和设备

高效液相色谱仪，配示差折光检测器。