食品添加剂 维生素B<Sub>1</Sub>(盐酸硫胺)检测

　　盐酸硫胺又叫维生素B1，白色结晶性粉末。盐酸硫胺有微弱特臭、味苦，有潮解性。熔点248℃，易溶于水，微溶于乙醇，不溶于醚和苯中。维生素B1具有维持正常糖代谢及神经传导的功能，用于治疗脚气病和中枢神经及胃肠病、心脏活动失调等。自然界中以酵母中维生素B1含量*多。盐酸硫胺可由2-甲基呋喃和乙烯腈等合成或由β-乙氧基丙酸乙酯和甲酸乙酯等合成。

　　含量测定[2]

　　普通小麦中维生素B1含量的测定方法如下：

　　一、普通小麦中维生素B1的提取

　　(1)小麦籽粒收获后，晒干，采用旋风磨制粉(旋风式粉碎磨)，充分混匀后将磨好的粉状样品(即全麦粉)于-20℃条件下避光保存。

　　(2)称取小麦粉2.5g于100ml的蓝盖试剂瓶中，加入25ml醋酸钠溶液(0.05M，pH4.5)，盖紧盖子，放在混旋器上混合，使粉状样品充分湿润。

　　(3)将混合后的粉状样品分别加入木瓜蛋白酶(50mg)，1%还原型谷胱甘肽水溶液(250μl)，酸性磷酸酶(10mg)，α-淀粉酶(5mg)，每次添加酶后充分混匀。

　　(4)将混合后的粉状样品置于恒温振荡器中，180rpm，37℃，酶解18h。

　　(5)振荡完成后，放置室温。转移至50ml的容量瓶中用超纯水定容，滤纸过滤。

　　(6)取2ml**次的滤液放入10ml的离心管中，加入2ml碱性铁氰化钾溶液，摇匀，静置5min。

　　(7)再加2mL正丁醇，用力振荡，4℃，4400×g离心3min，吸取上层清液，过滤0.2μm的醋酸纤维膜，用于维生素B1的色谱测定。

　　二、小麦中维生素B1含量的测定

　　(1)依据如下色谱条件进行HPLC检测：

　　仪器：岛津LC-2010系统，配备RF10Axl荧光检测器;

　　色谱柱：WatersXTerraRP18(150×4.6mm，5μm)高效液相色谱柱;

　　流动相：甲醇-0.05M醋酸钠溶液(pH4.5)，体积比为30：70混合;洗脱方式为等度洗脱;

　　柱温：35℃;样品室温度：4℃;

　　激发波长/发射波长：366nm/435nm;

　　进样体积：10μl。

　　(2)测试数据处理：工作站软件为Labosolutions;

　　根据维生素B1标准样品的保留时间确定小麦中维生素B1的出峰时间，根据如下步骤分别制作标准样品中维生素B1浓度和峰面积之间的标准曲线：

　　1)配制5种不同浓度的维生素B1标准品的盐酸溶液;

　　2)将维生素B1标准品的盐酸溶液进行上述小麦中维生素B1的提取方法中的衍生化和所述离心步骤(具体条件相同)，得到的上清液过0.2μm醋酸纤维膜得到维生素B1标准品溶液;

　　3)将所述维生素B1标准品溶液进行高效液相检测，得到不同浓度所述维生素B1标准品溶液的峰面积，以峰面积为横坐标，以维生素B1标准品溶液的浓度为纵坐标，制作标准曲线。

　　然后将已测166份小麦样品的峰面积数据代入标准曲线，即可得到维生素B1含量。