食品添加剂 维生素B<Sub>6</Sub>检测

6 分析步骤

6.1 试样预处理

6.1.1 含淀粉的试样：称取混合均匀固体试样约5.0g （精确至0.0001g）,加入约25mL 45℃～50℃ 的水，或称取混合均匀液体试样约20.0g（精确至0.0001g）于150 mL锥形瓶中。加入约0.5 g淀粉酶（4.1）,混匀后向锥形瓶中充氮，盖上瓶塞，置50℃～60℃培养箱内约30min。取出冷却至室温。

6.1.2 不含淀粉的试样：称取混合均匀固体试样约5.0g（精确至0.0001g）,加入约25mL 45℃～50℃的水，或称取混合均匀液体试样约20.0g（精确至0.0001g）于150 mL锥形瓶中。混匀并充分溶解， 静置5min～10min,冷却至室温。

6.2 待测液的制备

6.2.1 用盐酸溶液（4.6）调节试样溶液的pH值至1.7±0.1,放置约1min。再用氢氧化钠溶液（4.7）调节试样溶液的pH值至4.5±0.1。

6.2.2 将试样溶液转移至50mL容量瓶中，用水冲洗锥形瓶。洗液合并于50mL容量瓶中，用水定容 至 50 mL。

6.2.3 把上述容量瓶放入超声波振荡器中，超声振荡约10min。

6.2.4 另取50mL三角瓶，上面放入三角漏斗和滤纸，把超声波振荡的试样溶液倒入其中，自然过滤。 滤液再经0.45um微孔滤膜加压过滤，用试管收集，即为试样待测液。

6.3参考色谱条件

色谱柱：C₁₈柱（粒径5um, 150mm×4.6mm）或同等性能的色谱柱。

流动相：甲醇（4.4），50mL,辛烷磺酸钠（4.2） 2.0g,三乙胺（4.5）2.5mL,用水溶解并定容到 1000mL后，用冰乙酸（4.3）调pH至3.0±0.1,再经0.45um微孔滤膜加压过滤。

流速：1.0mL/min。

检测波长：激发波长293nm,发射波长395 nm。

进样量：10uL。

6.4 定量分析

6.4.1 标准曲线绘制

将维生素B₆混合标准系列测定液（4.8.3）依次进行色谱测定。记录各组分的色谱峰面积或峰高，以峰面积或峰高为纵坐标，以标准测定液的浓度为横坐标， 绘制标准曲线。

6.4.2 试样测定

将试样待测液（6.2.4）进行色谱测定。记录各组分色谱峰面积或峰高，根据标准曲线计算出试样待 测液中维生素B₆各组分的浓度C_i。

7 分析结果的表述

7.1 试样中维生素B₆各组分的含量的计算

试样中维生素B₆各组分的含量按式（1）计算：

式中：

X_i—试样中组分的含量，单位为微克每百克(ug/100g)；

C_i—试样待测液中维生素B₆各组分的浓度，单位为微克每毫升(ug/mL);

m—试样的质量，单位为克(g);

V—试样溶液的体积，单位为毫升(mL)。

7.2 试样中维生素B₆的含量的计算

试样中维生素B₆的含量按式(2)计算：

X=X_醇+X_醛X1.012+X_胺×1.006................... (2)

式中：

X—试样中维生素B₆含量，单位为微克每百克(ug/100g)；

X_醇—试样中吡哆醇含量，单位为微克每百克(ug/100g)；

X_醛—试样中吡哆醛含量，单位为微克每百克(ug/100g);

X_胺—试样中吡哆胺含量，单位为微克每百克(ug/100g);

1.012——吡哆醛的含量换算成吡哆醇的系数；

1.006—吡哆胺的含量换算成吡哆醇的系数。

注：试样中维生素B₆含量以吡哆醇计。

以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。

8 精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的**差值不得超过算术平均值的10%。

9 其他

本标准检出限为：吡哆醇1.5ug/100g、吡哆醛1.3ug/100g, 吡哆胺1.6ng/100g。