食品（大类） GB 5413.20 – 2013 食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定
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原理
试样中的胆碱经酸水解后变成游离态的胆碱,再经酶氧化后与显色剂反应生成有色物质,其颜色的深浅在一定浓度范围内与胆碱含量成正比。
试剂和材料
注:除非另有说明,本标准所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的三级水，
3.1试剂
3.1.1三羟甲基氨基甲烷[(CH:OH),CNH:]。3.1.2苯酚(C.H,OH)。
3.1.3浓盐酸(HCl)。3.1.4氢氧化钠(NaOH)。
3.1.5胆碱氧化酶;置于―20℃保存。3.1.6过氧化物酶:置于2℃~8℃保存。3.1.74-氨基安替比林(C.H3N,O 。3.1.8磷脂酶D:置于―20℃保存。
3.2试剂配制
3.2.1 盐酸(1 mol/L):量取85 mL浓盐酸加水稀释至1 000 mL。3.2.2盐酸(3 mol/L):量取125 ml浓盐酸加水稀释至500 ml。3.2.3Tris缓冲溶液(0.05 mol/L) : pH一8.0土0.2。
称取6.057 g三羟甲基氨基甲烷溶入500 mL蒸馏水中,用1 mol/L盐酸调pH至8.0士0.2,用蒸馏水定容至1 000 mL。此溶液在4℃冰箱中可保存1个月。
3.2.4︰用于酶反应的显色剂;取100~120活力单位的胆碱氧化酶、250个~280个活力单位的过氧化物酶、75个~100个活力单位的磷脂酶D,15 mg 4-氨基安替比林,50 mg苯酚置于 100 mL的容量瓶中,用0.05 mol/LTris缓冲溶液稀释至刻度。临用时配制。
3.2.5氢氧化钠溶液(500 g/L):称取500 g氢氧化钠,溶于水并稀释至1 000 mL。
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