GB5009.24-2016食品安全国家标准食品检测黄曲霉毒素M族检测

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1.范围

本标准规定了食品检测黄曲霉毒素M1黄曲霉毒素M2(以下简称AFTM1AFTM2)的测定方法。

**法为同位素稀释液相色谱-串联质谱法,适用于乳、乳制品含乳特殊膳食用食品检测AFTM1AFTM2的测定。

第二法为高效液相色谱法,适用范围同**法。

第三法为酶联免疫吸附筛查法,适用于乳、乳制品含乳特殊膳食用食品检测AFTM1的筛査测定。

**法同位素稀释液相色谱-串联质谱法

2.原理

试样检测的黄曲霉毒素M1黄曲霉毒素M2用甲醇水溶液提取,上清液用水或磷酸盐缓冲液稀释后,经免疫亲柱净化富集,净化液浓缩、定容过滤后经液相色谱分离,串联质谱检测,同位素内标法定量。

3.试剂材料

除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。

3.1试剂

3.1.1乙腈(CH3CN):色谱纯。

3.1.2甲醇(CH3OH):色谱纯

3.1.3乙酸铵(CH3COONH4)。

3.1.4氯化钠(NaCl)。

3.1.5磷酸氢二钠(Na2HPO4)。

3.1.6磷酸二氢钾(KH2PO4)。

3.1.7氯化钾(KCl)。

3.1.8盐酸(HCl)。

3.1.9石油醚(CnH2n+2):沸程为30℃～60℃。

3.2试剂配制

3.2.1乙酸铵溶液(5mmol/L):称取0.39g乙酸铵,溶于1000mL水检测,混匀。

3.2.2乙腈-水溶液(25+75):量取250mL乙腈加入750mL水检测,混匀。

3.2.3乙腈-甲醇溶液(50+50):量取500mL乙腈加500mL甲醇检测,混匀。

3.2.4磷酸盐缓冲溶液(以下简称PBS):称取8.00g氯化钠、1.20g磷酸氢二钠(或2.92g十二水磷酸氢二钠)、0.20g磷酸二氢钾、0.20g氯化钾,用900mL水溶解后,用盐酸调节pH至7.4,再加水至1000mL。

3.3标准品

3.3.1AFTM1标准品(C17H12O7,CAS:6795-23-9):纯度≥98%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

3.3.2AFTM2标准品(C17H14O7,CAS:6885-57-0):纯度≥98%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

3.3.313C17-AFTM1同位素溶液(13C17H14O7):0.5μg/mL。

3.4标准溶液配制

3.4.1标准储备溶液(10μg/mL):分别称取AFTM1AFTM21mg(精确至0.01mg),分别用乙腈溶解并定容至100mL。将溶液转移至棕色试剂瓶检测,在-20℃下避光密封保存。临用前进行浓度校准(校准方法参见附录A)。

3.4.2混合标准储备溶液(1.0μg/mL):分别准确吸取10μg/MLAFTMAFTM标准储备液1.00mL于同一10mL容量瓶检测,加乙腈稀释至刻度,得到1.0μg/mL的混合标准液。此溶液密封后避光4℃保存,有效期3个月。

3.4.3混合标准工作液(100ng/mL):准确吸取混合标准储备溶液(1.0μg/mL)1.00mL至10mL容量瓶检测,乙腈定容。此溶液密封后避光4℃下保存,有效期3个月。

3.4.450ng/mL同位素内标工作液1(13C17-AFTM1):取AFTM1同位素内标(0.5μg/mL)1mL,用乙腈稀释至10mL。在-20℃下保存,供测定液体样品时使用。有效期3个月。

3.4.55ng/mL同位素内标工作液2(13C17-AFTM1):取AFTM1同位素内标(0.5μg/mL)100μL,用乙腈稀释至10mL。在-20℃下保存,供测定固体样品时使用。有效期3个月。

3.4.6标准系列工作溶液:分别准确吸取标准工作液5μL、10μL、50μL、100μL、200μL、500μL至10mL容量瓶检测,加入100μL50ng/mL的同位素内标工作液,用初始流动相定容至刻度,配制AFTM1AFTM2的浓度均为0.05ng/mL、0.1ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL的系列标准溶液。

4.仪器设备

4.1天平:感量0.01g、0.001g0.00001g。

4.2水浴锅:温控50℃±2℃。

4.3涡旋混合器。

4.4超声波清洗器。

4.5离心机:≥6000r/min。

4.6旋转蒸发仪。

4.7固相萃取装置(带真空泵)。

4.8氮吹仪。

4.9液相色谱-串联质谱仪:带电喷雾离子源。

4.10圆孔筛:1mm～2mm孔径。

4.11玻璃纤维滤纸:快速,高载量,液体检测颗粒保留1.6μm。

4.12一次性微孔滤头:带0.22μm微孔滤膜(所选用滤膜应采用标准溶液检验确认无吸附现象,方可使用）。

《GB5009.24-2016食品安全国家标准食品检测黄曲霉毒素M族的测定》