DB35/T1220-2011大豆疫霉菌致病性测定检测

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1范围

本标准规定了大豆疫霉菌致病性测定过程的致病性测定、结果计算、测定材料灭活处理的方法。

本标准适用于大豆疫霉菌致病性的测定。

2术语与定义

下列术语定义适用于本标准。

2.1人工接种Artificalinoculation

用人工培养的病原物，在人工控制的条件下，接种大豆植株诱发病害，根据大豆植株的发病程度判断病原菌的致病性强弱。

2.2接种体Inoculant

用于人工接种致病性鉴定用的大豆疫霉菌(Phytophthorasojae)卵孢子悬浮液。

2.3下胚轴伤口接种Hypocotylsinoculationtechnique

供试品种生长至2叶~3叶真叶时，用带7号针头的接种用注射器(2mL)，以针尖在大豆苗子叶下茎0.5cm处向下划1cm长的伤口，将接种体0.5mL喷于伤口处。

2.4对照品种Contrastcultivar

在致病性测定时选定的感病品种Williams当地主栽品种。

3致病性测定方法

3.1育苗

用于致病性测定的供试大豆品种(品系)对照品种分别播于以新蛭石为基质的大小适宜的容器检测，株距(1~2)×(1~2)cm，育苗期温度控制在20℃~30℃。每处理应不少于15株，设置3个重复。

3.2接种体制备

将供试菌株的菌丝块移至胡萝卜培养基(参见附录A)上，25℃~28℃恒温下黑暗培养8d~10d，刮取培养基表面的培养物，用组织捣碎杋配以适量无菌水将培养物捣碎成匀浆。在光学显微镜下观察培养物匀浆检测大豆疫霉菌卵孢子的数量，用血球计数板将孢子悬浮液的终浓度调配至每毫升约含2×10的4次方个孢子。接种体应在使用当天制备。

3.3接种时间

测定的大豆苗长至2叶~3叶真叶期。

3.4接种方法

采用下胚轴接种方法。

3.5接种后管理

接种后的大豆苗在20℃~25℃、相对湿度90%以上保湿48h，转入20℃~30℃的温室培养，保持土壤含水量70%~80%。

3.6调查部位

大豆苗下胚轴。

3.7调查时间

接种4d后，当感病对照品种的株发病率75%以上、发病程度达到7级(参见附录B)以上方可进行病情调査。每隔1d调査一次病情，至少连续调査5次。

3.8病情调查与记载

按调査标准(参见附录B)逐株调査，记载病级。

4病情指数计算

将供试大豆品种的病情指数按计算公式(1)计算。

病情指数=∑病级株数×相应病级代表值×100/(调查总株数×*高病级代表值)(1)

5测定材料的灭活处理

5.1剩余接种体带回实验室经灭菌处理。

5.2将致病性测定后的大豆病株集检测焚烧处理。

5.3用于栽培大豆苗的基质带回实验室进行160℃干热灭菌处理。

5.4用于栽培大豆苗的盆钵带回实验室，80℃水浴处理2h以上。